荧光定量-武汉贝科新肽公司

通过对洋葱细胞的亚细胞定位，可以发现洋葱中的类黄酮、多酚等物质主要分布在质膜和细胞壁中。这些物质在质膜上的分布可能与洋葱的抗病性和抗逆性有关，而在细胞壁中的分布则可能与洋葱细胞的机械强度和结构稳定性有关。此外，洋葱中的一些酶类和基因也可能在不同的亚细胞结构中发挥不同的作用。

总之，亚细胞定位是研究洋葱等植物细胞中生物活性物质分布和作用的重要方法之一。通过亚细胞定位，可以更好地了解这些物质在细胞内的具体位置和作用机制，为进一步研究洋葱的营养和健康价值提供科学依据。

亚细胞定位操作步骤

1、通过一些在线网站预测亚细胞定位

2、亚细胞定位载体构建

（1）引物设计：利用引物设计软件，根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。

（2）载体构建：将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。

3、细胞转染

当细胞生长到对数生长期时，接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，荧光定量，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。

4、激光扫描共聚焦显微镜观察

将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦显微镜观察，采取图像。

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