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双分子荧光互补技术是一种在生物学领域中广泛应用的实验技术。该技术利用荧光标记的两个分子,通过荧光共振能量转移(FRET)原理,检测两个分子之间的相互作用。下面将详细介绍双分子荧光互补技术的原理、实验步骤、应用和发展趋势。
双分子荧光互补技术的原理
双分子荧光互补技术是基于荧光共振能量转移(FRET)原理的。当两个荧光基团在一个紧密的空间内相互靠近时,一个荧光基团发射的荧光能量会被另一个基团吸收,导致第二个基团也发射荧光。这种荧光能量转移现象称为荧光共振能量转移。通过检测两个荧光基团之间的能量转移效率,可以推断出两个分子之间的距离和相互作用情况。
为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色?
在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中,种植培养苗子时是正常接受光照的,叶片中含有大量叶绿体,而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时,共定位marker一般为红色荧光(在560nm左右的激发光下),实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响,但视野下看着比较混淆,尤其叠加后二者不易分清,因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色,以显示和共定位marker的区别。