BIFC-武汉贝科新肽科技公司(图)

为什么不先对基因做预测，在预测的结果上直接做共定位？

不同的预测网站有不同的计算方法，同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的，对于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推荐先做普通定位，根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。

适用于什么实验场景？

（1）基因功能研究，文章里总少不了这一项。

（2）研究蛋白相互作用，与酵母双杂实验结果相互验证。

细胞膜及内膜系统相关的协同作用

黏着斑激酶（FAK）定位于细胞质黏着斑、细胞核和内体中。在细胞质黏着斑中，FAK 通过调控细胞黏着斑的解聚与组装及多个蛋白质的磷酸化从而调节细胞的增殖和迁移。在内体中，FAK 通过 FERM 结构域定位到内体并被。内体中整合素的信号转导时间比质膜上持续的时间更长，并且能够阻止肿1瘤细胞发生失巢凋亡，因此，内体 FAK 可通过抵抗失巢凋亡促进肿1瘤细胞的转移。而在细胞核中，FAK 可导致 p53 的多聚泛素化及降解，从而影响正常细胞的存活和肿1瘤细胞的生长。此外，核 FAK 还能够通过调节细胞的因子和趋化因子的表达促进肿1瘤免疫逃逸的发生。这表明 FAK 在不同亚细胞定位下，与不同的蛋白质协同作用，共同调控肿1瘤的发生和发展。

理解复杂生理过程：细胞内的各种生理过程是由不同亚细胞位置的蛋白质协同作用完成的。亚细胞定位研究可以帮助我们更好地理解这些复杂生理过程的机制。

设计靶标：许多的作用靶点是特定亚细胞位置的蛋白质。准确确定蛋白质的亚细胞定位可以为设计提供有价值的靶标信息。

亚细胞定位的研究方法：

融合报告基因定位法：将待研究的蛋白质与报告基因融合，BIFC，通过观察报告基因的表达位置来确定蛋白质的亚细胞定位。常用的报告基因有绿色荧光蛋白（GFP）等。

免疫组织化学定位法：利用特异性与蛋白质结合，通过免疫组织化学技术检测蛋白质在细胞内的位置。

蛋白质组学定位技术：通过对细胞内不同亚细胞组分的蛋白质进行分离和鉴定，确定蛋白质的亚细胞定位。

共分离标记酶辅助定位法：利用与特定亚细胞结构相关的标记酶，通过共分离实验确定蛋白质的亚细胞定位。

生物信息学预测：基于蛋白质的氨基酸序列等信息，利用计算机算法预测蛋白质的亚细胞定位。