荧光原位杂交-武汉贝科新肽公司

原位杂交杂交液

（一）杂交液内除含一定浓度的标记探针外，还含有较高浓度的盐类、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及载体DNA或RNA等。

（二）杂交液中含有较高浓度的Na+可使杂交率增加，可以减低探针与组织标本之间的静电结合。

（三）贾酰胺可使杂交温度降低，所以杂交液中加入适量的甲酰胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。

（四）硫酸葡聚糖能与水结合，从而减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度，以达到提高杂交率的目的。

FISH技术的基本步骤包括探针制备、样品预处理、探针与样品的杂交、信号检测和图像分析等。在探针制备过程中，使用荧光标记物代替同位素标记物来标记探针。在样品预处理过程中，细胞或组织的固定、裂解和去除非特异性蛋白质等操作都是必要的，以提高探针与目标序列的亲和力和特异性。在探针与样品的杂交过程中，荧光原位杂交，探针与样品中的目标序列进行互补性杂交，形成可检测的荧光信号。在信号检测和图像分析过程中，使用高灵敏度荧光显微镜检测荧光信号并获取高分辨率的细胞图像。

原位杂交（In situ hybridazation）

固定

收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%2%多聚甲醛溶液洗，然后换成，在-20C 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)

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