染色体荧光原位杂交-湖北原位杂交-贝科新肽

原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，染色体荧光原位杂交，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，染色体原位杂交，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，原位杂交检测，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，湖北原位杂交，拍照。

6）4C冰箱保存。

荧光原位杂交（FISH）技术具有以下优点：

可多重染色：利用不同的荧光染料标记不同的探针，可以实现多重荧光原位杂交，从而同时检测多个序列，提高实验效率了。

高度创新性和性：FISH技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位，还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究，在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。

植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面：

1. 制备组织样品：从植物中取出需要研究的组织样品，如根、茎、叶等。

2. 固定组织样品：将组织样品固定在载玻片上，通常使用或乙醇等化学物质进行固定。

3. 处理组织样品：对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理，以便于DNA探针的穿透和结合。

4. 制备DNA探针：根据需要研究的基因序列，设计并合成DNA探针。DNA探针可以标记荧光染料或性同位素，以便于检测。

5. 杂交DNA探针：将DNA探针与组织样品进行杂交，通常需要在高温下进行，以便于DNA探针与RNA或DNA结合。

6. 检测杂交信号：通过荧光显微镜或计数器等设备，检测DNA探针与RNA或DNA的结合情况，确定目标基因的表达模式和位置。