双分子荧光互补技术-武汉贝科新肽科技公司

亚细胞定位的应用实例：

蛋白质亚细胞定位预测算法：王艺皓等人提出了一种基于堆栈式降噪自编码器（SDAE）深度网络的蛋白质亚细胞定位算法。该算法首先对蛋白质序列进行特征提取并融合，然后输入到 SDAE 深度网络自动学习更有效的特征表示，后选用 Softmax 回归分类器进行亚细胞的分类预测。实验结果表明，该算法可以有效提高蛋白质亚细胞定位预测的准确性。

洋葱亚细胞定位的方法包括但不限于以下三种：

荧光法：利用抗原与的特异性结合，双分子荧光互补技术，在细胞内产生荧光标记，从而确定细胞内抗原的分布位置。

GFP融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。

亚细胞分离法：通过一定的物理或化学方法，将细胞进行破碎，然后通过离心、密度梯度离心等方法将细胞器分离出来，再对分离出来的各个细胞器进行成分和结构分析。

GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光，从而可以地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白（GFP）是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色荧光。通过基因工程技术，绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组，在后代中持续表达，并且能根据启动子特异性地表达。

使用GFP必须构建融合蛋白载体，并在转染之后有效表达。这样，若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在GFP信号，说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。