湖北GISH-贝科新肽

植物染色体原位杂交是一种重要的分子生物学技术，它可以用来研究植物基因组的结构和功能。该技术利用DNA探针与目标DNA序列的互补性结合，通过荧光或性标记来检测目标DNA序列在染色体上的位置和数量。

植物染色体原位杂交技术的基本原理是将DNA探针标记上荧光或性同位素，然后将其与目标DNA序列进行杂交。在杂交过程中，探针与目标DNA序列互补结合，形成稳定的双链DNA分子。随后，通过荧光或性同位素探测技术，可以检测到目标DNA序列在染色体上的位置和数量。

原位杂交技术的技术流程

原位杂交技术的技术流程包括样本处理、探针制备、杂交反应和信号检测等步骤。样本处理包括组织或细胞的固定、包埋、切片和脱氧核糖核酸酶消化等步骤，目的是保持组织或细胞的原始结构和核酸序列的完整性。探针制备包括标记探针、纯化和变性等步骤，目的是提高探针的特异性和敏感性。杂交反应包括预杂交、杂交和洗脱等步骤，目的是使探针与目标核酸序列形成双链复合物。信号检测包括显色反应、荧光染色和性同位素标记等步骤，目的是可视化目标核酸序列的分布。

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，GISH，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2） 置换成30％的PBST溶液，放置5分钟

3） 置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟

5） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4） 用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。