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原位杂交技术还在以下生物领域有应用:
细胞化学和学:原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布,例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外,还可以应用于学研究,例如检测细胞、分子的分布和定位等。
神经科学:在神经科学领域,原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如,通过标记特定基因的探针,可以检测神经元中特定基因的表达和定位,进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。
一. 原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的PBST溶液,放置5分钟
3) 置换成PBST溶液,放置5分钟,原位杂交,重复一次
4) 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟
5) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。
3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,室温。
4) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,原位杂交公司,室温。
同一样本可以多次做原位杂交实验吗?
一般情况下,如果操作没有得到理想的结果,染色体原位杂交,是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针,还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本,处理方法略有不同。
原位杂交实操中哪些因素比较重要?
重要的因素:温度、光照、湿度和试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响着荧光染料的强度,所以探针要避光保存,其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存;各种试剂pH也要达到要求,这也直接关系到原位杂交的稳定性。
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