武汉贝科新肽-BIFC

蛋白质序列特征：

利用改进型伪氨基酸组成法（PseAAC）、伪位置特异性得分矩阵法（PsePSSM）和三联体编码法（CT）对蛋白质序列进行特征提取，并将这三种方法得到的特征向量进行融合，以得到一个全新的蛋白质序列特征表达模型，然后输入到堆栈式降噪自编码器（SDAE）深度网络里自动学习更有效的特征表示，选用 Softmax 回归分类器进行亚细胞的分类预测，可有效提高蛋白质亚细胞定位预测的准确性。

利用 PSI-BLAST 工具搜索蛋白质序列，提取位点特异性谱中的位点特异性得分矩阵作为蛋白质的一类特征，并计算 4 等分序列的氨基酸含量以及 1～7 阶二肽含量作为另外两类特征，由这三类特征一共得到蛋白质序列的 12 个特征向量。通过设计一个简单加权函数对各类特征向量加权处理，作为神经网络预测器的输入，可提高蛋白质亚细胞定位预测的精度。

亚细胞定位操作步骤

1、通过一些在线网站预测亚细胞定位

2、亚细胞定位载体构建

（1）引物设计：利用引物设计软件，BIFC，根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。

（2）载体构建：将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。

3、细胞转染

当细胞生长到对数生长期时，接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时，将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。

4、激光扫描共聚焦显微镜观察

将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点，根据实验需求选择对应激发波长（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦显微镜观察，采取图像。

洋葱亚细胞定位培养是一种研究洋葱中亚细胞结构和功能的实验技术。通过这种技术，科学家可以分离和培养洋葱中的各种亚细胞结构，如细胞核、线粒体、叶绿体等，以深入研究这些结构的功能和相互作用。

洋葱是一种常见的蔬菜，具有许多营养价值和健康益处。然而，洋葱的亚细胞结构和功能一直是一个研究的领域。为了更好地了解洋葱的生物学和营养价值，科学家开发了亚细胞定位培养技术来研究洋葱中的亚细胞结构和功能。