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蛋白质亚细胞定位的研究方法
1、融合报告基因定位法
将绿色荧光蛋白(GFP)及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶(GUS)等报告基因,与目标蛋白基因融合在一起,由目标蛋白的引导信号进行亚细胞定位,对报告蛋白的光信号进行跟踪和观察,从而确定目标蛋白的定位。该方法是目前使用广泛的蛋白质亚细胞定位研究方法。
2、荧光标记定位法
将反应与化学光学信号相结合,通过特异性的荧光标记与目标蛋白(抗原)结合,蛋白亚细胞定位,通过荧光信号检测,确定目标蛋白的亚细胞位置。目前标记信号不局限于荧光素,还有同位素、酶、胶体金颗粒、纳米金属颗粒等。
细胞膜及内膜系统相关的协同作用
黏着斑激酶(FAK)定位于细胞质黏着斑、细胞核和内体中。在细胞质黏着斑中,FAK 通过调控细胞黏着斑的解聚与组装及多个蛋白质的磷酸化从而调节细胞的增殖和迁移。在内体中,FAK 通过 FERM 结构域定位到内体并被。内体中整合素的信号转导时间比质膜上持续的时间更长,并且能够阻止肿1瘤细胞发生失巢凋亡,因此,内体 FAK 可通过抵抗失巢凋亡促进肿1瘤细胞的转移。而在细胞核中,湖北亚细胞定位,FAK 可导致 p53 的多聚泛素化及降解,从而影响正常细胞的存活和肿1瘤细胞的生长。此外,洋葱亚细胞定位,核 FAK 还能够通过调节细胞的因子和趋化因子的表达促进肿1瘤免疫逃逸的发生。这表明 FAK 在不同亚细胞定位下,与不同的蛋白质协同作用,共同调控肿1瘤的发生和发展。
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