荧光定量-武汉贝科新肽科技公司(图)

基因法转化洋葱表皮细胞：

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，荧光定量，振荡混匀。基因GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。

细胞分馏和免疫印迹：先通过差速离心等方法将细胞匀浆分离成不同的亚细胞组分，如细胞核、线粒体、细胞质等。然后，利用免疫印迹技术，使用针对目标蛋白的特异性来检测该蛋白在各个亚细胞组分中的存在情况，以此推断其亚细胞定位。

电子显微镜技术：包括免疫电镜技术等，可在超微结构水平上对细胞内的蛋白质等生物分子进行定位。通过将特异性与细胞内的目标蛋白结合，再用电子显微镜观察标记物的位置，能够地确定目标蛋白在细胞内的亚细胞定位。

亚细胞定位是指确定某种蛋白质或其他生物分子在细胞内的具体位置，比如是在细胞核、细胞质、线粒体、内质网等哪个亚细胞结构中。以下是关于它的详细介绍：

重要性

了解蛋白质功能：蛋白质的功能与其所处的亚细胞位置密切相关。例如，某些蛋白质只有在细胞核内才能发挥转录调控的作用，通过结合到特定的 DNA 序列上，调节基因的表达。

揭示疾病机制：许多疾病的发生往往与蛋白质的亚细胞定位异常有关。比如，在某些神经退行性疾病中，特定蛋白质可能会错误地聚集在细胞的某些区域，导致细胞功能障碍和疾病的发展。

研发：明确蛋白质的亚细胞定位有助于研发。如果知道某种疾病相关蛋白位于特定的亚细胞结构中，就可以设计能够靶向该亚细胞结构的，提高的和特异性。