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内质网
内质网是细胞中的一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网,我们可以使用一种名为GFP-HDEL的蛋白质来标记它们。GFP-HDEL是一种带有绿色荧光的蛋白质,它可以与内质网上的HDEL序列结合。在洋葱细胞中,内质网通常位于细胞的中央或周围。
高尔基体
高尔基体是细胞中的另一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体,我们可以使用一种名为FM4-64的化合物来标记它们。FM4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体,从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。
为什么要提供GFP空载的对照图片?
(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
亚细胞定位是指确定某种蛋白质或其他生物分子在细胞内的具体位置,比如是在细胞核、细胞质、线粒体、内质网等哪个亚细胞结构中。以下是关于它的详细介绍:
重要性
了解蛋白质功能:蛋白质的功能与其所处的亚细胞位置密切相关。例如,某些蛋白质只有在细胞核内才能发挥转录调控的作用,通过结合到特定的 DNA 序列上,双分子荧光互补,调节基因的表达。
揭示疾病机制:许多疾病的发生往往与蛋白质的亚细胞定位异常有关。比如,在某些神经退行性疾病中,特定蛋白质可能会错误地聚集在细胞的某些区域,导致细胞功能障碍和疾病的发展。
研发:明确蛋白质的亚细胞定位有助于研发。如果知道某种疾病相关蛋白位于特定的亚细胞结构中,就可以设计能够靶向该亚细胞结构的,提高的和特异性。
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