荧光原位杂交技术-贝科新肽科技公司

原位杂交技术原位杂交技术（In Situ Hybridization， ISH）是一种在生物样本（如组织切片、细胞涂片等）的原始位置上，通过核酸分子间的碱基互补配对原理，荧光原位杂交技术，检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。它能保留目标核酸在样本中的空间分布信息，是研究基因表达定位、染色体结构及病原体等的重要工具。一、技术原理原位杂交的原理是核酸分子的碱基互补配对：

探针设计：人工合成与目标核酸（DNA 或 RNA）序列互补的单链核酸片段（称为 “探针”），并对探针进行标记（如荧光、生物素等）。杂交反应：将标记的探针与经过处理的样本（含待检测核酸）孵育，探针通过碱基互补配对（A-T/U、G-C）与目标核酸特异性结合，形成杂交复合物。信号检测：通过检测探针上的标记物（如荧光信号、显色信号），定位目标核酸在样本中的位置和表达强度。

实验步骤（以石蜡组织切片 RNA 原位杂交为例）样本制备组织固定：用甲醛等固定剂保存组织形态和核酸（避免 RNA 降解）；包埋与切片：将固定组织石蜡包埋，切成 5-10μm 薄片并贴附于载玻片。预处理脱蜡：用、乙醇去除石蜡，暴露组织；通透处理：用蛋白酶 K 等消化组织蛋白，增加探针对细胞的穿透性；变性（仅 DNA 原位杂交）：高温使 DNA 双链解旋为单链（RNA 原位杂交无需此步骤，因 RNA 为单链）。

荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ

Hybridization，FISH）利用核酸分子单链之间互补的碱基序列，通过标记的核酸探针与目标DNA或RNA进行杂交，进而定位和检测特定DNA序列的技术。探针标记可以采用荧光、或者生物素。FISH技术的基本原理是使用已知的标记单链核酸作为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行杂交，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因此可以通过探针直接与染色体进行杂交，从而将特定的基因在染色体上定位。与传统的性标记原位杂交相比，FISH技术具有快速、检测信号强、杂交特异性高和可以多重染色等特点。该方法适用于植物染色体检测、土壤（泥巴）中细菌检测。

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