贝科新肽科技公司(多图)-荧光原位杂交技术

原位杂交技术自 1969 年由 Pardue 和 Gall 建立以来，不断优化：

从性标记发展为荧光标记（FISH），实现了多重标记和高分辨率成像；结合共聚焦显微镜、超高分辨率显微镜，进一步提升了信号检测的精度；与测序技术结合（如原位测序），可在原位获取高通量核酸序列信息，为空间转录组学等领域提供了强大工具。

原位杂交技术凭借 “空间定位” 的优势，在分子生物学、医学诊断和生命科学研究中占据重要地位，是连接分子水平与形态学水平的关键桥梁。

原位杂交技术原位杂交技术（In Situ Hybridization，荧光原位杂交技术， ISH）是一种在生物样本（如组织切片、细胞涂片等）的原始位置上，通过核酸分子间的碱基互补配对原理，检测特定 DNA 或 RNA 序列的分子生物学技术。它能保留目标核酸在样本中的空间分布信息，是研究基因表达定位、染色体结构及病原体等的重要工具。一、技术原理原位杂交的原理是核酸分子的碱基互补配对：

探针设计：人工合成与目标核酸（DNA 或 RNA）序列互补的单链核酸片段（称为 “探针”），并对探针进行标记（如荧光、生物素等）。杂交反应：将标记的探针与经过处理的样本（含待检测核酸）孵育，探针通过碱基互补配对（A-T/U、G-C）与目标核酸特异性结合，形成杂交复合物。信号检测：通过检测探针上的标记物（如荧光信号、显色信号），定位目标核酸在样本中的位置和表达强度。

关键组成要素1. 探针探针是与目标核酸互补的核酸片段，是原位杂交的 “检测工具”，其设计直接影响技术的特异性和灵敏度：

类型：根据目标核酸类型可分为 DNA 探针、RNA 探针（cRNA 探针）、寡核苷酸探针等。标记方式：性标记（如 32P、3?S）：灵敏度高，但需防护，已逐渐被非性标记替代；非性标记：如荧光素（FITC、Cy3）、生物素、等，安全性高，易检测。2. 样本需保留核酸的原始位置和结构，常见样本类型：

组织切片（冷冻切片或石蜡包埋切片）；细胞涂片、爬片；染色体标本（用于染色体原位杂交）。3. 杂交条件杂交温度、盐浓度、探针浓度等需优化，以确保探针与目标核酸、特异性结合（避免非特异性杂交）。

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