武汉慢病毒载体构建-贝科新肽

双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescence Complementation，BiFC）是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的强大技术。它利用荧光蛋白的特性，将两个不同的荧光蛋白片段（通常是黄色荧光蛋白和绿色荧光蛋白）分别与两个不同的蛋白质结合，以检测它们之间的相互作用。

BiFC的原理是基于荧光蛋白的特性，这些荧光蛋白可以发射出特定的光子，从而在细胞中产生荧光信号。当两个不同的荧光蛋白片段结合在一起时，它们会形成一个完整的荧光蛋白，并发出更强的荧光信号。因此，通过观察荧光信号的强度和分布，我们可以推断出两个蛋白质是否相互作用以及相互作用的确切位置。

直接法

将标记的特异性荧光，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光，室温下干燥后封片、镜检。

间接法

如检查未知抗原，先用已知未标记的特异（）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的，慢病毒载体构建，再用标记的抗（第二）与抗原标本反应，使之形成—抗原—复合物，再用水洗去未反应的标记，干燥、封片后镜检。如果检查未知，则表明抗原标本是已知的，待检为，其它步骤的抗原检查相同。

除了洋葱亚细胞定位，还有许多其他亚细胞定位方法。其中，比较常见的有：

荧光法：将学方法与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。用荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等也称为荧光细胞(或组织)化学技术。

GFP融合蛋白表达法：将目的蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)融合，通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达位置。

亚细胞结构分离定位法。