GISH-武汉贝科新肽公司

禾谷菌 CgRab5A 的亚细胞定位研究：刘涵等人利用多片段一步法将 CgRab5A 自身启动子、GFP 片段和 CgRab5A 开放阅读框（ORF）片段到 pKNT 载体上，转化型禾谷菌的原生质体后，通过共聚焦显微镜观察 GFP-CgRab5A 在菌丝和孢子内的定位情况。结果表明，GFP-CgRab5A 在菌丝和孢子细胞内均呈点状分布，定位于早期内涵体上。

水稻 OsUF 的亚细胞定位：丁作美等人通过得到水稻 E3 泛素连接酶 — 泛素融合蛋白（OsUF）基因的 cDNA 序列，并利用 Gateway 同源重组体系将 OsUF cDNA 全长重组到融合表达绿色荧光蛋白（GFP）的表达载体上，通过农杆菌介导的烟草瞬时表达系统进行亚细胞定位。结果显示，OsUF 蛋白定位在细胞核。

为什么有的共定位图片中叶绿体通道是玫红色？

在拟南芥、、玉米、大麦、小麦等材料中，种植培养苗子时是正常接受光照的，叶片中含有大量叶绿体，而叶绿素在640nm左右的激发光下可产生红色的自发荧光。当在这些含叶绿体较多的受体材料中做共定位实验时，共定位marker一般为红色荧光（在560nm左右的激发光下），实验及共聚焦拍摄时两个波长通道的荧光互不影响，但视野下看着比较混淆，尤其叠加后二者不易分清，因此只是在颜色显示上将叶绿体自发荧光设置为玫红色，以显示和共定位marker的区别。

理解复杂生理过程：细胞内的各种生理过程是由不同亚细胞位置的蛋白质协同作用完成的。亚细胞定位研究可以帮助我们更好地理解这些复杂生理过程的机制。

设计靶标：许多的作用靶点是特定亚细胞位置的蛋白质。准确确定蛋白质的亚细胞定位可以为设计提供有价值的靶标信息。

亚细胞定位的研究方法：

融合报告基因定位法：将待研究的蛋白质与报告基因融合，通过观察报告基因的表达位置来确定蛋白质的亚细胞定位。常用的报告基因有绿色荧光蛋白（GFP）等。

免疫组织化学定位法：利用特异性与蛋白质结合，GISH，通过免疫组织化学技术检测蛋白质在细胞内的位置。

蛋白质组学定位技术：通过对细胞内不同亚细胞组分的蛋白质进行分离和鉴定，确定蛋白质的亚细胞定位。

共分离标记酶辅助定位法：利用与特定亚细胞结构相关的标记酶，通过共分离实验确定蛋白质的亚细胞定位。

生物信息学预测：基于蛋白质的氨基酸序列等信息，利用计算机算法预测蛋白质的亚细胞定位。