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经营模式: | 其他 |
所在地区: | 湖北 武汉 |
联系卖家: | 夏先生 先生 |
手机号码: | 15002786799 |
公司官网: | bkxtbio.com.cn |
公司地址: | 湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号 |
原理简介
GFP、RFP等荧光蛋白因其的荧光性质和灵敏性,常作为报告基因研究并分析基因产物在细胞中的定位和相互作用等。将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合,通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术,使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达,目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器,通过显微镜观察荧光蛋白在细胞内显示的位置,确定目标蛋白的位置,蛋白免疫定位,从而确定目标蛋白的亚细胞定位情况。
内质网
内质网是细胞中的一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位内质网,我们可以使用一种名为GFP-HDEL的蛋白质来标记它们。GFP-HDEL是一种带有绿色荧光的蛋白质,它可以与内质网上的HDEL序列结合。在洋葱细胞中,内质网通常位于细胞的中央或周围。
高尔基体
高尔基体是细胞中的另一个复杂网络,它负责合成和转运蛋白质。为了定位高尔基体,我们可以使用一种名为FM4-64的化合物来标记它们。FM4-64可以穿过细胞膜并进入高尔基体,从而发出红色荧光。在洋葱细胞中高尔基体通常位于细胞的中央或周围。
亚细胞定位操作步骤
1、通过一些在线网站预测亚细胞定位
2、亚细胞定位载体构建
(1)引物设计:利用引物设计软件,根据pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位点设计目的基因引物。
(2)载体构建:将PCR产物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS,得到表达目的基因与EGP融合蛋白质的真核表达载体。
3、细胞转染
当细胞生长到对数生长期时,接种到共聚焦显微镜的玻璃底培养皿(35mm petri dish,10 mm Microwell)中,培养过夜。当细胞贴壁率达到30%~50%时,将融合绿色荧光蛋白GFP的重组载体质粒和目标细胞器质粒共转染细胞。37℃孵箱培养24~72h。
4、激光扫描共聚焦显微镜观察
将上述细胞分别在24、36、48、72h的时间点,根据实验需求选择对应激发波长(常用405nm、488nm和561nm),使用共聚焦显微镜观察,采取图像。
蛋白免疫定位-贝科新肽(推荐商家)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。武汉贝科新肽科技有限公司为客户提供“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”等业务,公司拥有“原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选”等品牌,专注于化学试剂等行业。,在湖北省武汉市洪山区关山大道289号紫菘逸景华庭二期109栋2层2002-3号的名声不错。欢迎来电垂询,联系人:夏先生。武汉贝科新肽科技有限公司 电话:027-87381761 传真:- 联系人:夏先生 15002786799
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