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杂交 (1) 盛有2×SSC的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,荧光原位杂交,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放到位于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,染色体原位杂交,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去细菌碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%甲酰胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。
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植物原位杂交除了在遗传育种方面的应用,还在其他领域有着广泛的应用,包括:
植物基因表达模式研究:通过植物原位杂交技术可以检测特定基因在不同组织或不同生长条件下的表达模式,有助于了解基因的功能和作用机制。
植物基因组研究:植物原位杂交技术可以用于基因组研究,原位杂交,例如染色体构象、基因组变异和基因组进化等方面,原位杂交技术服务,有助于深入了解植物基因组的特征和结构。
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荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是在已有的性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性DNA分子原位杂交技术。它利用荧光标记的核酸片段为探针,与染色体上或DNA显微切片上的特异fl-N:~行杂交,通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号DNA序列在染色体或DNA显微切片上的目的DNA序列,进而确定其杂交位点。FISH技术检测时间短,检测灵敏度高,无污染,已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。
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