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武汉贝科新肽科技有限公司

主营: 原位杂交,亚细胞定位,蛋白互作,启动子筛选

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荧光原位杂交-武汉贝科新肽公司

询盘留言|投诉|申领|删除 产品编号:596722216                    更新时间:2025-05-04
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原位杂交:

原位杂交是指用特定探针定位、检测DNA、RNA的一种有效的实验方法,通过把特点序列客隆到特殊载体上,通过转录酶反转一条天然的RNA探针,将探针和切片样品进行杂交,通过一系列显色方法,来确定RNA或者DNA表达区域;本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记,灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒,GISH/ISH/FISH按照探针进行收费,每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片,收费为1万5千元,GISH杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量大优惠!

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料.FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,荧光原位杂交,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

一. 原位杂交天

1. 重新水化和固定

1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。

2) 置换成30%的PBST溶液,放置5分钟

3) 置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次

4) 置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟

5) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。

蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)

1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。

2) 用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。

3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,室温。

4) 用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。

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