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为什么要提供GFP空载的对照图片?
(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。
(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。
拍摄时为什么有明场通道?
(1)显示细胞状态,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,蛋白互作,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。
(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。
黄金纳米棒在癌细胞中的亚细胞定位:Sana Mesiya 等人研究了黄金纳米棒在癌细胞中的亚细胞定位。结果表明,黄金纳米棒定位于癌细胞的线粒体和溶酶体中,这一发现可能有助于开发基于纳米技术的激光免疫疗法。
槟榔 Catalase 基因的亚细胞定位:梁婷等人通过同源和 RACE 技术获得槟榔全长 cDNA,并对其进行生物信息学分析及亚细胞定位。结果表明,槟榔 Catalase 基因编码的蛋白质可能定位于特定的细胞器中。
GFP是绿色荧光蛋白,在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光,从而可以地定位蛋白质的位置。绿色萤光蛋白(GFP)是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色荧光。通过基因工程技术,绿色萤光蛋白(GFP)基因能转进不同物种的基因组,在后代中持续表达,并且能根据启动子特异性地表达。
使用GFP必须构建融合蛋白载体,并在转染之后有效表达。这样,若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在GFP信号,说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位,这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。
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