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原位杂交第三天

1）        用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。

2）        用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位杂交技术还在以下生物领域有应用：

细胞化学和学：原位杂交技术可以用于研究细胞内特定化学物质的定位和分布，例如检测细胞内酶、、神经递质等物质的分布和定位。此外，还可以应用于学研究，例如检测细胞、分子的分布和定位等。

神经科学：在神经科学领域，原位杂交技术常被用于研究神经元的生长、发育和连接等过程。例如，通过标记特定基因的探针，GISH，可以检测神经元中特定基因的表达和定位，进而研究其在神经信号传递、神经环路形成等方面的作用。

生物领域应用原位杂交技术的例子：

物种进化与系统发生学研究：在物种进化与系统发生学研究中，原位杂交技术可以用于检测物种之间的亲缘关系和进化历程。例如，可以比较不同物种之间特定基因序列的差异，进而研究它们的亲缘关系和进化历程。

原位杂交技术在基因表达和调控、细胞分化与发育、研究和物种进化与系统发生学等领域都有广泛的应用价值，为深入探究生命现象、促进生物技术的发展提供了有力的技术支持。